Estandarización de la técnica de pcr múltiple para la identificación de escherichia coli o157:h7 en butifarras
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Fecha
2017
Autores
Caro Olivera, Nadian Daniela
Luquez Zambrano, Eddie José
Soto Varela, Zamira
Pérez Lavalle, Liliana
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Editor
Ediciones Univerisidad Simón Bolívar
Facultad de Ciencias Básicas y Biomédicas
Facultad de Ciencias Básicas y Biomédicas
Resumen
Los productos cárnicos se consideran una de las fuentes potenciales de transmisión de la cepa enterohemorrágica E. coli O157:H7 la cual ha sido asociada a colitis hemorrágica y al síndrome hemolítico-urémico (SHU) pudiendo llegar a causar la muerte. El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo estandarizar la técnica de PCR múltiple, para la detección de Escherichia coli O157:H7 en butifarras de Soledad, Atlántico. Para el cumplimiento de este objetivo, se compararon los protocolos propuestos por dos artículos: Desmachellier (1998) para la amplificación del gen rfbE que codifica para la perosamina sintasa y el de Gannon (1997) para la amplificación del gen fliC que codifica para la proteína flagelina. Se llevaron a cabo 8 ensayos, durante los cuales se modificaron variables, tales como las concentraciones del MgCl2 y la enzima Taq polimerasa y la temperatura de hibridación, los cuales influyen significativamente en las amplificaciones de los genes de interés. Una vez estandarizadas y optimizadas, estas fueron evaluadas en un ensayo piloto usando ADN extraído de 17 muestras de butifarras provenientes de microempresas del municipio de Soledad, las cuales fueron seleccionadas por un alto recuento de E. coli. Las condiciones estandarizadas para la PCR múltiple fueron: 2,0 U de enzima, 2mM de MgCl2 y una temperatura de hibridación de 62,6 °C. Los resultados del ensayo piloto mostraron una amplificación del 95% para el gen fliC y del 24% para el gen rfbE y se obtuvo un total del 17% para la amplificación de ambos genes, lo que representa la presencia de este serotipo en este producto cárnico, demostrando las malas prácticas de manufactura.
Descripción
Palabras clave
Polymerase Chain Reaction, Escherichia coli, Carne